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基因合成儀原理

更新時間:2022-08-09      點擊次數(shù):1454
  1、sanger法:雙脫氧測序的原理,DNA合成時加上一個ddNTP從而終止這條鏈的延伸,毛細管電泳讀取分析序列。一般教材講的都是這種方法,經(jīng)典,讀長800bp,但是通量小成本高。
 
  2、高通量測序方法:454也稱焦磷酸測序,一個run下來約400M的數(shù)據(jù)量。將emulsionPCR產(chǎn)物連磁珠上,放入Pico Titer Plate,測序反應(yīng)是通過釋放PPi經(jīng)過ATP硫酸化酶和熒光素酶作用發(fā)光,CCD捕捉拍照,反應(yīng)是連續(xù)的,所以遇到連續(xù)的堿基如polyA時,454易產(chǎn)生誤差。
 
  3、Solexa:邊合成邊測序,將DNA單鏈固定在芯片上,合成DNA簇,是一種可逆阻斷的合成反應(yīng),每個循環(huán)只加上一個堿基、系統(tǒng)拍照一次。通過讀取拍照信號分析序列,一個run約200個G數(shù)據(jù)量以上。目前能量最高,不足是讀長短,現(xiàn)在有PE150,可以測通300bp。
 
  4、Ion torrent:特點是小巧。試劑通過集成的流體通路進入芯片中,密布于芯片上的反應(yīng)孔立即成為上百萬個微反應(yīng)體系。這種流體體系、微體系機械設(shè)計和半導(dǎo)體的技術(shù)組合,使研究人員能夠在2小時內(nèi)獲取從10Mb到1Gb以上的高精確度序列。*新一種,還沒廣泛應(yīng)用。
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