768道基因合成儀反應(yīng)步驟
更新時(shí)間：2022-01-05 點(diǎn)擊次數(shù)：1334
768道基因合成儀儀器硬件易于操作，只需將反應(yīng)板放在儀器中，便可開(kāi)始合成。維護(hù)簡(jiǎn)單快捷。更換管子或閥門(mén)很容易。所使用耗材具有廣泛的兼容性，既能使用預(yù)裝填合成柱，也可以使通用合成柱。智能清污排水系統(tǒng)在用真空系統(tǒng)排空柱之前、期間和之后；標(biāo)準(zhǔn)氬氣或氮?dú)獯祾咧喜扛艚^空氣和水氣，并且氣體的使用量非常低。提供給試劑瓶的惰性氣體由儀器中的兩個(gè)不同調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)。一個(gè)調(diào)節(jié)單體和活化劑瓶的壓力，另一個(gè)調(diào)節(jié)其他瓶子的壓力。每個(gè)調(diào)節(jié)器都有一個(gè)壓力計(jì)來(lái)指示該試劑的壓力。
768道基因合成儀合成技術(shù)原理：
采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA的片段,它具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體.上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的,相鄰的核苷酸通過(guò)3'→5'磷酸二酯鍵連接。
768道基因合成儀反應(yīng)步驟：
1.將預(yù)先連接在固相載體CPG上的活性基團(tuán)被保護(hù)的核苷酸與三氯*酸反應(yīng),脫去其5'-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT ,獲得游離的5'-羥基。
2.亞磷酰胺保護(hù)的核苷酸單體, 與活化劑四氮唑混合.得到核苷亞磷酸活化中間體. 它的3'端被活化，與CPG載體上連接堿基的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)。
3.帶帽(capping)反應(yīng)?？s合反應(yīng)中會(huì)有少量5"-羥基沒(méi)有參加反應(yīng).用乙酸酐和1-甲基咪唑封閉5"-羥基,使其不能再繼續(xù)發(fā)生反應(yīng),這種短片段在純化時(shí)可以分離去除。
4.在氧化劑碘的作用下,亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。
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